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TOP10   化学转化感受态细胞

货号 规格 纯度
EC030H-M 50×100 μL

产品基本信息

本品为大肠杆菌Top 10(基因型:F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG)制作的高效感受态,生长速度快于DH5α,广泛用于基因克隆、质粒转化等试验,可用于蓝白斑筛选,pUC19 质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。该菌缺失核酸内切酶 (endA1),提高了质粒DNA 的产量和质量;重组酶(recA1)缺陷型,减少插入片段发生同源重组的概率;具有硫酸链霉素抗性 (StrR),适用于毒基因克隆和质粒扩增。

存储条件

-80℃

转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒或连接产物,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min; 2. 放42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min; 3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min; 4. 离心(质粒转化无需离心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。 2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。 3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。